主要應(yīng)用
HRP的應(yīng)用極其廣泛,其核心角色是作為標記物,用于檢測和信號放大。
1. 免疫檢測 - 酶聯(lián)免疫吸附試驗
這是HRP經(jīng)典和重要的應(yīng)用。HRP通常與抗體結(jié)合,形成酶標抗體。
原理:將目標抗原固定在板上,加入HRP標記的抗體與之特異性結(jié)合。洗去未結(jié)合的抗體后,加入HRP的底物溶液。
檢測:
生色底物:如TMB,反應(yīng)后產(chǎn)生藍色(加入終止液后變黃色),通過酶標儀測量吸光度值進行定量。這是ELISA試劑盒常見的形式。
化學(xué)發(fā)光底物:如魯米諾,反應(yīng)后產(chǎn)生光信號,通過化學(xué)發(fā)光儀檢測。靈敏度通常比顯色法更高。
HRP的用途可以根據(jù)所選用的底物類型,實現(xiàn)不同形式的信號輸出:
檢測類型 常用底物 輸出信號 主要應(yīng)用場景
顯色檢測 TMB, DAB, ABTS 產(chǎn)生顏色(藍/黃、棕、綠) ELISA, IHC(肉眼或普通顯微鏡可見)
化學(xué)發(fā)光檢測 魯米諾,ECL 產(chǎn)生光 Western Blot, 高靈敏度ELISA(需成像儀)
熒光檢測 Amplex Red, Tyramide 產(chǎn)生熒光 靈敏度IHC或細胞成像(需熒光顯微鏡)

辣根過氧化物酶 的核心用途。
HRP本身不產(chǎn)生顏色或光,但它是一個極其的 “信號放大器” 。它的所有用途都基于一個核心原理:催化過氧化氫(H?O?)去氧化各種底物,從而產(chǎn)生可檢測的信號(顏色、光或熒光)。
以下是其核心和廣泛的用途,主要集中在生物化學(xué)、分子生物學(xué)和臨床診斷領(lǐng)域
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