魯米諾本身不發(fā)光，在?堿性環(huán)境?（如氫氧化鈉溶液）中才能啟動反應。在此條件下，魯米諾分子中的氨基（-NH?）和酰肼基（-CONHNH?）失去質子，形成帶兩個負電荷的?雙負離子?（Dianion）。這一形態(tài)具有更高的反應活性，為后續(xù)氧化做好準備 。

影響魯米諾發(fā)光效果的關鍵因素
?pH值?：需維持堿性環(huán)境（pH 8–11），過酸或過堿均會抑制反應 ；
?溫度?：高溫加快反應速率，但可能縮短發(fā)光時間；
?催化劑種類與濃度?：鐵離子、銅離子、辣根過氧化物酶等均可催化，濃度影響發(fā)光強度；
?干擾物質?：漂白劑（含次氯酸鈉）、銅合金、某些清潔劑也可能引發(fā)發(fā)光，造成假陽性 。

魯米諾可用于檢測細胞內活性氧、吞噬功能、信號通路活性，評估免疫細胞狀態(tài) 。在核酸雜交實驗中作為探針標記物，用于基因表達分析 。