細(xì)胞色素b5含量試劑盒微量法說(shuō)明書
微量法 100管/96樣
正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
產(chǎn)品名稱:細(xì)胞色素b5含量試劑盒微量法
貨號(hào):LZ-S01266
規(guī)格 : 100管/96樣
測(cè)試方法:微量法
產(chǎn)品分類:P459系列
發(fā)貨地 :上海
測(cè)定意義:
細(xì)胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶,在外源物質(zhì)代謝中具有重要作用,尤其是藥物和毒物的代謝。細(xì)胞色素P450和細(xì)胞色素b5是P450酶系的兩個(gè)血紅素蛋白,其比值的變化與P450代謝活性密切相關(guān)。
測(cè)定原理:
氧化型細(xì)胞色素b5經(jīng)連二亞硫酸鈉還原后,在424nm處有大吸收峰,通過(guò)測(cè)定424nm和490nm處吸光值的差異,即可計(jì)算出細(xì)胞色素b5的含量。
自備儀器和用品:
普通離心機(jī),超速離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一?粉劑核2 瓶,4℃保存?臨用前各加 100mL 蒸餾水,充?溶解?
試劑二?液體核1 瓶,4℃保存?
試劑й?粉劑核1 瓶,4℃保存?
工作液配制?臨用前配制,戴一次性手套,小心打開(kāi)試劑й瓶蓋,加試劑二 20mL 充?溶解,
4℃避光可保存 1 周?
樣品中細(xì)胞色素 b5 提?。?/span>
1?除去?胞?,線粒體等大?子物質(zhì)??約 0.5g 組?,加入 1mL 試劑一,冰к充?研磨,
10 000g 4℃離心 30min,取к清液,轉(zhuǎn)入超速離心管中?
2?粗制微粒體?100 000g,4℃離心 60min,?к清液?
3?除血紅蛋白等雜質(zhì)?向步驟 2 的沉淀中加 1mL 試劑一,蓋緊后充?震蕩溶解,100 000g
離心 30min,?к清液?
4??測(cè)液?向步驟 3 的沉淀中加試劑二 0.5mL,蓋緊后充?震蕩溶解,即?測(cè)液,該?測(cè)
液需當(dāng)天測(cè)定?
操作步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫20℃,ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,以便 不時(shí)觀察,待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí),即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟,但卻是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對(duì)照顏色極淺,在定性測(cè)定中一般可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
生化檢測(cè)試劑盒常見(jiàn)問(wèn)題:
在使用生化檢測(cè)試劑盒時(shí),可能會(huì)遇到一系列常見(jiàn)問(wèn)題,這些問(wèn)題主要涉及到試劑盒的使用、保存、有效期、樣本處理以及實(shí)驗(yàn)操作等方面。以下是一些常見(jiàn)的問(wèn)題及其解決方法:成都
一、?測(cè)定原理?:生化試劑盒通過(guò)化學(xué)反應(yīng)或酶促反應(yīng)測(cè)定樣本中物質(zhì)的含量或酶活性。常用的儀器包括分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀,它們的測(cè)定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水質(zhì)、動(dòng)植物組織、血清、細(xì)胞細(xì)菌、食品等樣本均可進(jìn)行測(cè)定?。
?二、選擇不同規(guī)格的試劑盒?:根據(jù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況選擇合適的試劑盒。如果實(shí)驗(yàn)室有酶標(biāo)儀且具備檢測(cè)波長(zhǎng),可以選擇微量法試劑盒;如果有分光光度計(jì)及相應(yīng)規(guī)格的比色皿,則可以選擇常量法或微量法試劑盒。建議購(gòu)買前仔細(xì)閱讀說(shuō)明書,確認(rèn)自備的儀器和試劑是否符合要求?。
?三、保存方法?:收到試劑盒后,如果暫時(shí)不用,應(yīng)按照外包裝上指示的溫度保存。拆開(kāi)包裝后,應(yīng)按照每個(gè)試劑的保存溫度進(jìn)行保存,注意有些試劑忌反復(fù)凍融,有些粉劑溶解后性質(zhì)不穩(wěn)定?。
四、?有效期?:一般生化試劑盒的有效期為6個(gè)月,也有特殊貨號(hào)的有效期為1年。具體以實(shí)際收到貨物的標(biāo)簽信息為準(zhǔn)?1。
?五、樣本處理?:新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標(biāo)的測(cè)定,但有些生理活性物質(zhì)容易降解,建議使用新鮮樣本測(cè)定。對(duì)于冷凍樣本,建議在-70℃或液氮中保存。樣本在不同溫度下的保存時(shí)間有所不同,例如4℃可保存一周,-20℃保存一個(gè)月,-80℃保存3個(gè)月?。
?六、土壤酶活性測(cè)定?:對(duì)于土壤酶活性的測(cè)定,建議將鮮土風(fēng)干并過(guò)篩后取樣,以測(cè)定的重復(fù)性。若使用鮮土測(cè)定,需樣本的顆粒大小一致且水分含量相似?。
七、?預(yù)測(cè)定?:在進(jìn)行正式測(cè)定前,建議選擇2-3個(gè)預(yù)期結(jié)果差別較大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。通過(guò)預(yù)測(cè)定可以全面反映樣品特點(diǎn)、試劑質(zhì)量、儀器設(shè)備穩(wěn)定性和操作規(guī)范性,確保正式測(cè)定結(jié)果真實(shí)可靠?。
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