乳酸含量（LA）試劑盒可見分光光度法說明書

可見分光光度法 50管/24樣 

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

產(chǎn)品名稱：乳酸含量（LA）試劑盒可見分光光度法

貨號：LZ-S01166-A

規(guī)格 : 50管/24樣

測試方法:可見分光光度法

產(chǎn)品分類：糖酵解系列

發(fā)貨地：上海

測定意義：

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細(xì)胞內(nèi)能量代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標(biāo)。

測定原理：

乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時(shí)使NAD+還原生成NADH和H+，H+傳遞給PMS生成的PMSH2還原INT生成紅色物質(zhì)，在530nm處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、研缽、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 55mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 12mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1 支，-20℃避光保存。臨用前加入 1.5mL 蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加 15mL 蒸餾水充分溶解。

試劑五：粉劑×1 支，4℃避光保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，4℃保存。

顯色液：臨用前根據(jù)用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1（mL)：

0.3（mL)：3（mL)：15（mg）的比例充分混勻。（注意：現(xiàn)配現(xiàn)用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，試劑盒中帶有 5 個(gè)棕色空瓶）

樣本處理

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，12000g 離心 10min，取上清測定。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；于 4℃，12000g 離心 10min，取上清測定。

3. 血清：直接測定。 

操作步驟:

1.加樣

1. 除包被外都需45度加樣

2.加樣體積要準(zhǔn)確

3.管底加樣,不能加在管壁上

4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡

2.溫浴

1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫度的水浴箱。

2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。

3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕紗布的金屬濕盒中。

4.加入底物后,反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫20℃,ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺上,以便 不時(shí)觀察,待對照管顯色適當(dāng)時(shí),即可終止酶反應(yīng)。

3.洗滌

1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。

2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。

4.讀板

1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般可采用目視比色。

2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。

生化檢測試劑盒常見問題：

在使用生化檢測試劑盒時(shí)，可能會遇到一系列常見問題，這些問題主要涉及到試劑盒的使用、保存、有效期、樣本處理以及實(shí)驗(yàn)操作等方面。以下是一些常見的問題及其解決方法：

一、?測定原理?：生化試劑盒通過化學(xué)反應(yīng)或酶促反應(yīng)測定樣本中物質(zhì)的含量或酶活性。常用的儀器包括分光光度計(jì)和酶標(biāo)儀，它們的測定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水質(zhì)、動(dòng)植物組織、血清、細(xì)胞細(xì)菌、食品等樣本均可進(jìn)行測定?。

?二、選擇不同規(guī)格的試劑盒?：根據(jù)實(shí)驗(yàn)的實(shí)際情況選擇合適的試劑盒。如果實(shí)驗(yàn)室有酶標(biāo)儀且具備檢測波長，可以選擇微量法試劑盒；如果有分光光度計(jì)及相應(yīng)規(guī)格的比色皿，則可以選擇常量法或微量法試劑盒。建議購買前仔細(xì)閱讀說明書，確認(rèn)自備的儀器和試劑是否符合要求?。

?三、保存方法?：收到試劑盒后，如果暫時(shí)不用，應(yīng)按照外包裝上指示的溫度保存。拆開包裝后，應(yīng)按照每個(gè)試劑的保存溫度進(jìn)行保存，注意有些試劑忌反復(fù)凍融，有些粉劑溶解后性質(zhì)不穩(wěn)定?。

四、?有效期?：一般生化試劑盒的有效期為6個(gè)月，也有特殊貨號的有效期為1年。具體以實(shí)際收到貨物的標(biāo)簽信息為準(zhǔn)?1。

?五、樣本處理?：新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標(biāo)的測定，但有些生理活性物質(zhì)容易降解，建議使用新鮮樣本測定。對于冷凍樣本，建議在-70℃或液氮中保存。樣本在不同溫度下的保存時(shí)間有所不同，例如4℃可保存一周，-20℃保存一個(gè)月，-80℃保存3個(gè)月?。

?六、土壤酶活性測定?：對于土壤酶活性的測定，建議將鮮土風(fēng)干并過篩后取樣，以測定的重復(fù)性。若使用鮮土測定，需樣本的顆粒大小一致且水分含量相似?。

七、?預(yù)測定?：在進(jìn)行正式測定前，建議選擇2-3個(gè)預(yù)期結(jié)果差別較大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。通過預(yù)測定可以全面反映樣品特點(diǎn)、試劑質(zhì)量、儀器設(shè)備穩(wěn)定性和操作規(guī)范性，確保正式測定結(jié)果真實(shí)可靠?。

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